文章插图
1
制样：
裂解缓冲液或者超声处理 。（使用RIPA裂解液是需按照100:1加入蛋白酶抑制剂）
2
电泳：
根据蛋白大小确定合适的PAGE胶浓度，推荐上样量为20-30ug总蛋白 。
3
转膜：
湿转和半干转都可 。但在待检测蛋白分子量较大或低内源水平湿转移方法更佳 。
4
洗膜：
10min/次*3次 。
5
封闭：
含5%脱脂奶粉的TBST中封闭1h 。
6
洗膜：
TBST中洗涤10min 。
7
孵育一抗：
一抗应在含5% BSA 或5% 脱脂牛奶的 TBST 缓冲液中稀释，参考产品说明书选择合适的一抗稀释比例 。5%推荐使用脱脂奶粉的TBST缓冲液，背景相对较低 。一抗4℃孵育过夜更好 。
8
洗膜：
10min/次*3次 。
9
孵育二抗：
建议在含5%脱脂牛奶TBST中稀释二抗.参考生产商建议选择合适的二抗稀释比例 。
10
洗膜：
10min/次*3次 。
11
检测：
化学发光检测 。

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